Биоактив — многогранный подход для решения эстетических проблем

 Н.Ю.Уколова1, Н.В. Грязева2, С.К.Матело1, А.Д.Исаев3, И.В.Амбросов3, А.В.Дирш4, Е.А.Коган5, Н.В.Жарков5, Е.А.Косткина1

1.ООО «Диарси Центр». 123592, Россия, Москва, ул. Кулакова, д.20, стр. 1Г.

DRC-center LLC.

2. ФГБУ ДПО «Центральная государственная медицинская академия».

FSBO Central State Medical Academy.

121359, Россия, Москва, ул. Маршала Тимошенко, 19, стр. 1А.

3. ООО «ВДС Фарма». 123592, Россия, Москва, ул. Кулакова, д.20, стр. 1Г.

WDS Pharma LLC.

4. ООО «ЕВРОКОСМЕД-Ступино».

142813, Россия, Московская область, Ступинский район, с. Старая Ситня, тер. 5 км автодороги Ступино-Малино, влад.1, стр.1. Eurocosmed-Stupino LLC.

5. Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова.

First Moscow State Medical University named after I.M. Sechenov.

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.

Уколова Наталья Юрьевна - к.м.н., врач-дерматовенеролог, врач-хирург, руководитель департамента «Косметология, трихология и нутрицевтика», специалист по разработке косметических продуктов ООО «Диарси Центр». Natalia Y. Ukolova.

Исаев Александр Дмитриевич – к.м.н., заместитель директора по науке ООО «ВДС Фарма». Alexander D. Isaev.

Амбросов Игорь Валерьевич – к.б.н., генеральный директор ООО «ВДС Фарма». Igor V. Ambrosov.

Дирш Алла Викторовна – к.м.н., врач-биофизик, главный технолог ООО «ЕВРОКОСМЕД-Ступино». Alla V. Dirsh.

Коган Евгения Алтаровна – д.м.н., профессор, заведующий кафедры патологической анатомии Первого Московского государственного медицинского университета имени И. М. Сеченова. Evgeniya A. Kogan.

Жарков Николай Владимирович – ведущий научный сотрудник отделения Клиническая морфология НИЦ Первого Московского государственного медицинского университета имени И. М. Сеченова. Nikolay V. Zharkov.

Косткина Екатерина Александровна – врач-дерматовенеролог, врач-анастезиолог-реаниматолог, ведущий тренер департамента «Косметологи, трихология, и нутрицевтика» ООО «Диарси Центр». Ekaterina A. Kostkina.

Резюме

Актуальность

В настоящее время среди различных методов инъекционных методик одно из ведущих мест занимает биоревитализация и мезотерапия. Традиционно для улучшения морфофункционального состояния кожи используется гиалуроновая кислота. Постоянно продолжается поиск новых активов, входящих в состав препаратов для биоревитализации, которые позволяли бы достичь выраженных клинических эффектов и положительного результата.

Цель

Изучить морфологические и иммуногистохимические показатели кожи человека после введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ».

Материалы и методы

Исследование выполнено на панч-биоптатах кожи заушной области 5-ти женщин-добровольцев перименопаузального возраста (средний возраст 51 год). Проводился курс интрадермального введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ», который состоял из 4-х процедур с интервалом введения 14 дней (между процедурами). Способ введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» – мультипунктурно.

Исследовались панч-биоптаты правой заушной области 5-ти женщин-добровольцев:

- 1 этап - до введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ»,

- 2 этап - после двух процедур,

- 3 этап - через две недели после 4-х процедур,

- 4 этап - спустя 1,5 месяца после 4-х процедур,

- 5 этап - через 9 мес. от начала процедур.

Полученные биоптаты фиксировались в 10% нейтральном формалине, заливались в парафин по общепринятой методике. Серийные парафиновые срезы окрашивались гематоксилином и эозином, толуидиновым синим, по Ван Гизону, ставилась PAS-реакция, проводились иммуногистохимические реакции.

Основные результаты

Доказано, что введение препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» вызывает усиление неоангиогенеза и накопление коллагеновых волокон в дерме, ремоделирование соединительной ткани дермы и стимуляцию синтеза в ней коллагена. Введение препарата на начальных этапах вызывает набухание, отличное от мукоидного (при окраске толуидиновым синим), что приводит к усилению водного обмена в клетках и стимуляции метаболических процессов в дерме.

Заключение

«Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» можно рекомендовать с целью омоложения кожи всем пациентам с признаками хроно- и фотостарения.

Ключевые слова: «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ», германий-органический комплекс.

Введение

Кожа – это многофункциональный орган организма человека, который не только обеспечивает защитную функцию, но и участвует во многих видах обмена. Кожа лица, шеи, рук и зоны декольте служит первым индикатором старения организма.

Старение кожи – запрограммированный, неизбежный, сложный, мультифакториальный процесс в организме человека [1]. В результате эндогенных и экзогенных факторов происходят инволюционные изменения кожи, которые проявляются сухостью, потерей эластичности, уменьшением толщины, дряблостью, появлением морщин, гравитационным птозом, пигментацией [2].

На клеточном уровне происходит обезвоживание структур кожи, в том числе и фибробластов, в результате чего изменяется рН, ионный состав и ионные силы межклеточной среды, что может нарушать нормальное функционирование и активность матриксных белков вследствие изменения их структуры или частичной их денатурации.

В настоящее время в арсенале современной эстетической косметологии имеется достаточно широкий выбор способов коррекции различных проблем кожи – хирургический и нехирургический (инъекционные методики, химические пилинги, дермабразия, лазерные шлифовки и др.).

Среди различных методов инъекционных методик одно из ведущих мест занимает биоревитализация и мезотерапия – это современные методы интрадермального введения растворов и гелей на основе гиалуроновой кислоты.

Данные методики предполагают использование материалов в определенной концентрации с целью восстановления физиологической среды и нормализации метаболических процессов в коже.

Слово «мезотерапия» имеет греческое происхождение («мезо» — средний, срединный, «терапия» — лечение). Данный метод впервые применил в 1950 году доктор Мишель Пистор (Франция), который эмпирическим путем пришел к выводу, что введение лекарственных средств необходимо выполнять как можно ближе к пораженному участку.

Термин «биоревитализация» и сама методика были представлены в 2001 году группой итальянских врачей во главе с   профессором А. Ди Пьетро.

Гиалуроновая кислота – важный компонент кожи человека, относящийся к группе мукополисахаридов и состоящий из остатков D – глюкуроновой кислоты и N - ацетил - D - глюкозамина. Число дисахаридов в готовой молекуле гуалуроновой кислоты может достигать 10 000 повторов или более, что соответствует молекулярной массе - около 1 нм. За счет особенностей химической структуры гиалуроновая кислота выполняет различные биологические функции:

- играет важную роль в процессах взаимодействия клеток,

- обладает высокой способностью удерживать воду, обеспечивая поддержание тургора кожи,

- создает оптимальные физиологические условия для пролиферации, усиления и восстановления активности фибробластов и естественных обновлений структуры дермы,

- обладает высокими антиоксидантными свойствами [3], [4]. 

Принимая во внимание важную роль гиалуроновой кислоты как компонента кожи, на ее основе созданы многообразные препараты для улучшения морфофункционального состояния кожи.

Группа компаний Диарси, в арсенале которой имеется линейка косметики FEMEGYL, разработала и выпустила новый российский препарат для проведения мезотерапии и биоревитализации.

Данный препарат содержит запатентованную формулу, и в его состав входят:

- комплекс гиалуроновых кислот 1,5 %,

- германий-органический хелатный комплекс,

- гамма-аминомасляная кислота.

Форма выпуска – флакон объемом 6 мл, что рассчитано на полный курс (2 процедуры) для получения заявленных эффектов:

§     восстановление защитного барьера кожи;

§     увеличение упругости и эластичности; 

§     обеспечение высокой степени увлажнения всех слоев кожи;

§     корректировка и уменьшение глубины морщин;

§     уменьшение признаков хроно- и фотостарения кожи.

Максимальное количество препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» необходимое для обработки зон лица, шеи и декольте – 3 мл.

Совместно с кафедрой патологической анатомии Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова выполнено исследование по изучению морфологических и иммуногистохимических показателей кожи 5-ти человек после воздействия препарат «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ».

Цель исследования: изучить морфологические и иммуногистохимические показатели кожи человека после воздействия препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ».

Материалы и методы: Исследование выполнено на панч-биоптатах кожи заушной области 5-ти женщин-добровольцев перименопаузального возраста (средний возраст 51 год). Проводился курс интрадермального введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ», который состоял из 4-х процедур с интервалом введения 14 дней (между процедурами). Способ введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» – мультипунктурно.

Исследовались панч-биоптаты правой заушной области 5-ти женщин-добровольцев:

- 1 этап - до введения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ»,

- 2 этап - после двух процедур,

- 3 этап - через две недели после 4-х процедур,

- 4 этап - спустя 1,5 месяца после 4-х процедур,

- 5 этап - через 9 мес. от начала процедур.

Полученные биоптаты фиксировались в 10% нейтральном формалине, заливались в парафин по общепринятой методике. Серийные парафиновые срезы окрашивались гематоксилином и эозином, толуидиновым синим, по Ван Гизону, ставилась PAS-реакция.

Иммуногистохимические реакции также проводились на серийных парафиновых срезах с использованием демаскировки антигенов в ретривере в соответствие с общепринятым протоколом.

Методом двойных антител выявляли коллагены I и III типов (DAKOCYTOMATION, в разведении 1:100), эластин, Ki-67(DAKOCYTOMATION, в разведении 1:100), VEGF (DAKOCYTOMATION, в разведении 1:100).

Сравнительный анализ коллагена I и III типов, эластина, VEGF, а также других гистоморфологических характеристик (наличие воспалительной реакции, ангиогенез и т.д.) проводили с помощью полуколичественного метода оценки интенсивности окрашивания гистологических препаратов (балльная система обсчета). При слабой окраске экспрессия маркера оценивалась в 2 балла, при умеренной – 4, при высокой – 6. Экспрессия маркера гладкомышечных и миофибробластических клеток (SMA), а также маркера клеточной пролиферации (Ki-67) в эпидермисе оценивалась в процентном соотношении положительно окрашенных клеток. Результаты оценивались с помощью статистического метода для малых выборок Манна-Уитни.

Основные результаты.

Сравнительная морфологическая характеристика изменений в коже на разных сроках после воздействия препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ».

Морфологические особенности кожи женщин заключались в относительно малой толщине эпидермиса. Структурные изменения кожи женщин после воздействия выявлялись и достигали максимума на 2-ом и 3-ем этапах и заключались в усилении неоангиогенеза в глубоких слоях дермы и в подкожно-жировой клетчатке и синтеза коллагена I и III типов (рис.1). 

В биоптатах наблюдалось нарастание отложений коллагена и нейтральных мукополисахаридов в экстрацеллюлярном матриксе дермы (рис.2), что также выявляется при окраске по Ван Гизону в увеличении относительной ширины дермы. 

После окончания воздействия сохраняется накопление коллагенов в дерме, однако снижаются отложения нейтральных мукополисахаридов в экстрацеллюлярном матриксе (рис.3).

Интересно, что при окраске толуидиновым синим ни на одном этапе не были выявлены отложения препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ» по феномену метахромазии, то есть в тканях препарат не накапливается, он сразу захватывается клетками.

Сравнительная иммуногистохимическая характеристика изменений в коже на разных сроках после воздействий препарата «Уникальный стерильный концентрат «БИОАКТИВ».

Иммуногистохимические изменения кожи женщин после введения препарата «Уникальный стерильный концентр «БИОАКТИВ» заключались в следующих результатах (см.рис.4,5,6):

1. Накопление коллагена I и III типов и изменение соотношения между коллагеном I и III типов, за счет относительного увеличения удельного веса коллагена I типа («молодого» коллаген) [5];

2. Сохранение стабильного количества эластина в дерме;

3. Стимуляция неоангиогенеза в глубоких слоях дермы, что проявляется в увеличении количества VEGF в эндотелии сосудов, прежде всего новообразованных;

4. Наличие относительно большего количества пролиферирующих клеток в эпидермисе вплоть до 3-го этапа исследования и снижение количества пролиферирующих клеток на 4-ом этапе.

Таблица 1. Сравнение коллагена I и III типов на разных этапах исследования.

Заключение.

Морфологическое исследование показало, что препарат не накапливается и не обнаруживается в биоптатах кожи. Эпидермис без патологических изменений. Обнаружено, что после проведения двух процедур - в дерме определяется набухание экстрацеллюлярного матрикса, преимущественно периваскулярного, и вокруг придатков кожи, со скоплениями в этих участках лимфогистиоцитарных элементов. При этом при окраске толуидиновым синим метахромазия не обнаруживается, что отличает его от мукоидного набухания при накоплении эндогенной гиалуроновой кислоты. Набухание сохраняется при исследовании биоптатов и после 4 процедуры, однако исчезает к 4 месяцу от начала исследования.

Происходит усиление неоангиогенеза и накопление коллагеновых волокон в дерме, что выявляется при окраске по Ван Гизону и иммуногистохимическом исследовании на VEGF и коллагены I и III типов.       

Препарат вызывает ремоделирование соединительной ткани дермы и стимуляцию синтеза в ней коллагена. Введение препарата на начальных этапах вызывает набухание, отличное от мукоидного (при окраске толуидиновым синим), что приводит к усилению водного обмена в клетках и стимуляции метаболических процессов в дерме.